Для изучения биологических особенностей, повышения частоты обнаружения микобактерии и элективного выделения ослабленных форм микобактерии в случае возможного их персистироваиия в исследуемом материале и определения видовой принадлежности возбудителя, а также с целью изучения особенностей патоморфологических реакций, вызываемых этими переживающими микобактериями, нами применен метод повторных многократных биологических пассажей на морских свинках. Многократные биологические пробы могут также дать представление о вирулентности персистирующих микобактерии и стабильности их свойств.
Посев производили одновременно на серию специальных элективных сред, среди которых были как обычно применяемые для выделения микобактерии туберкулеза среды, так и среды для выделения их L-форм. Каждую пробу материала засевали одновременно на 10 питательных сред, причем использовали 5 сред для посева материала после предварительной обработки и 5 сред для посева без обработки. Набор питательных сред представлен на схеме 2. Этот набор был применен согласно разработанной и предложенной Г. Я. Каган и В. С. Михайловой (1963) и В. Д. Тимаковым и Г. Я. Каган (1967) схеме выделения и Учета L-форм бактерий из патологического материала. Их схема широко апробирована в практике выделения из организма L-форм бактерий при различных неснецифических заболеваниях.
Необходимость применения такого набора питательных сред обусловлена тем, что при выделении L-форм бактерий из патологического материала требуется доказать, что выделенные L-формы действительно обнаружены в нем и индуцированы in vivo.
Посевы инкубировали при 37С в течение 3—4 под, после чего проводили макроскопическое изучение роста и микроскопию окрашенных и нативных препаратов в световом и фазово-контрастном микроскопах.
При обнаружении L-форм или L-структур незавершенного L-цикла производили пассирование (до 6 пассажей) на питательных средах 3, 4, 5 и высевы на среду 1 для получения реверсии.