На первых этапах наших исследований мы решили выяснить, как будет изменяться активность калликрепна и кининазы плазмы крови (карбок-сипептидазы N). Об активности калликрепна мы судили по общей ВАЭЭ-эстеразной активности плазмы крови, представляющей собой суммарную активность протеипаз трнпсиназного типа, в число которых входит кал-ликреин. Кроме того, нами была сделана попытка выяснить, как связаны их изменения с изменениями некоторых показателей метаболизма.
Мы обследовали группу больных с приобретенными пороками сердца, которым было произведено протезирование клапанов. Операции проводились в условиях искусственного кровообращения, при нормотермин, длительность перфузии составляла от 30 минут до 2 часов. В качестве гсмо-дплютанта был использован отечественный низкомолекулярный декстран. Показатели активности измеряли до операции (исходный фон), на ее этапах и после операции на 2, 7 и 15-е сутки. Кровь для исследований брали в стеклянную посуду, покрытую силиконом. Все исследования проводили в день взятия проб.
Определение активности карбоксипептидазы N. Карбокси-пептидазу N определяли в сыворотке крови спектрофотометрическим методом Фолька (I960) по расщеплению гпппурил-β-аргинина (ГА). Для определения брали 0,05 мл плазмы крови. Фермент для активации предварительно инкубировали в течение 15—20 минут при 37° с Г10-4М раствором СОС12 в 0,1 М трпс НС1 буфере рН 7,5 (1,5 мл). Затем добавляли 1,5 мл 110~3М раствор ГА в тот же буфер. Количество гиппуровой кислоты, полученной в результате реакции, определяли по измерению оптической плотности пробы при 254 ммк против 5 ¦ Ю-4 раствора ГА.
Активность кининазы выражалась в микромолях ГА (или ГК), расщепленного 1 мл плазмы крови в 1 минуту.
Определение ВАЗ Э-э стеразной активности плазмы крови. Измерение производилось спектрофотометрическим методом Траутшольда и Верле (1961). Определение осуществляли следующим образом: 0,03 мл плазмы крови разводили 2 мл 0,05 М трнс НС1 буфера с рН 8,0, добавляли 1 мл 1 ¦ 5 ¦ 10_3М ВАЭЭ в том же буфере. Оптическую плотность пробы измеряли при 253 ммк через каждые 10 минут против раствора ВАЭЭ, указанной концентрации. Результаты выражали в единицах. За одну единицу принимали количество сыворотки, которое гидролизует 1 ммк ВАЭЭ за 1 минуту. ВАЭЭ-эстеразную активность характеризовали числом единиц в 1 мл плазмы крови.